【藥品名稱】

通用名稱：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(酶聯免疫法)

英文名稱：Diagnostic Kit for Antibody to Human Immunodeficiency Virus  (ELISA)

漢語拼音：Renlei Mianyi Quexian Bingdu Kangti Zhenduan Shijihe ( Meilianmianyifa)

【包裝規格】

96人份/盒

【預期用途】

用于血液的篩查和臨床HIV病毒感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

采用EIA雙抗原夾心法檢測，在預包被有HIV抗原的反應孔內加入待測標本，若標本中有抗-HIV，則可在微孔板表面形成抗原-抗體復合物，再與酶標抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經顯色系統顯色后，根據OD 值判定有無HIV抗體的存在。

【主要組成成份】

1、HIV抗原包被板                   96孔×1塊

2、酶結合物　　　　　　　　　　    12ml×1瓶

3、HIV-1陽性對照　　               1.0ml×1瓶　

4、HIV-2陽性對照　　　             1.0ml×1瓶

5、陰性對照                         1.0ml×1瓶

6、濃縮洗滌液：用前每瓶1:20稀釋    50ml×1瓶

7、顯色劑A                    　    6ml×1瓶

8、顯色劑B　　　　　　　　　　　    6ml×1瓶

9、終止液                            6ml×1瓶

10、封板膠紙                           2片

11、說明書                           1份

【儲存條件及有效期】

2～8℃避光保存12個月。

【適用儀器】

1、微量移液器和潔凈的吸頭

2、37℃恒溫箱或水浴箱

3、計時器

4、洗板機

5、振蕩器

6、酶標儀 檢驗波長450nm，參考波長630nm

【樣本要求】

1、樣本采集不需要特殊準備，按照正常的采血技術收集血液，全血樣品最好先放置37℃靜置2小時，再將血樣品充分離心，3000轉/分鐘離心10分鐘以上，使血清或血漿不含或極少含血細胞。如果為抗凝血樣品，應將血樣品充分離心后，最好再放置室溫2小時以上。

2、樣本可使用血清或血漿，檸檬酸、肝素或EDTA等抗凝劑不會影響試驗結果。

3、樣本中含疊氮鈉會影響試驗結果，高度溶血的樣本，沒完全收縮的血清樣本或微生物污染的樣本可能會引起錯誤的結果。

4、新鮮的樣本在2～8℃無菌條件下可保存一星期，可長期儲存在-20℃或以下，避免反復凍融。

【檢驗方法】

1、每次試驗設陰性兩孔、HIV-1陽性對照和HIV-2陽性對照各兩孔，分別加入陰、陽性對照100μl，再設一孔空白對照，其余孔加入100μl被測樣本，置37℃溫育60分鐘。棄去孔內樣品，扣干。

2、洗板：

1）手工洗板：棄去反應板條孔內液體，在吸水紙上拍干；用洗滌液注滿每孔，勿溢出，靜置5～10秒，棄去孔內洗滌液，拍干，如此反復5次，拍干。

2）洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，洗液應注滿每孔，并確保每次吸凈無殘留，最后在吸水紙上拍干。

3、每孔加酶結合物100μl（空白對照孔不加），置37℃溫育30分鐘，同上法洗反應板5次。

4、每孔加顯色劑A液、B液各50μl，輕輕振蕩后，37℃避光靜置30分鐘。

5、 每孔加入終止液50μl終止反應，用酶標儀讀數，可選擇 450nm（以空白孔校零）或雙波長450/630nm，讀取各孔OD值。讀數須在終止反應后10分鐘內完成。

【參考值】

1、試驗設計要求HIV-1陽性對照和HIV-2陽性對照平均值均大于1.20，陰性對照平均值小于0.10，陽性、陰性對照OD值之差應大于1.20，否則本次試驗無效。

2、若陰性對照讀數小于0.05時，按0.05計算。

3、臨界值（Cut off value）=陰性對照平均值+0.10。

4、測試標本的OD值小于臨界值則為HIV抗體陰性。

5、測試標本的OD值等于或大于臨界值則為HIV抗體陽性。（注意：初試陽性標本應重新取樣進行雙孔復試，復試陽性者應按“全國艾滋病檢測管理規范”送HIV確證實驗室進行確證試驗）。

【檢驗結果的解釋】

1、陰性結果表明樣本中不含有抗-HIV，或樣本中的抗-HIV含量低于試劑盒的檢測范圍。

2、陽性結果表明樣本中含有抗-HIV，或非特異反應素。

3、陽性結果的樣本需要再進行重復試驗，只有經過重復或再重復試驗仍為陽性結果的樣本，可認為是HIV陽性。所有重復結果為陽性的樣本應經過適當的手段進行確認。

陽性結果的樣本如復檢為陰性結果應被認為是陰性樣本。重復不出陽性結果可能屬于下列一個或多個技術問題引致：

1） 由于儀器或加樣器造成的交叉污染。

2） 顯色劑被金屬離子污染。

3） 由于試劑滴漏造成的交叉污染。

4） 不充分的洗板或最后吸去不徹底。

【試驗方法的局限性】 

本品僅用于檢測血清或血漿中抗-HIV，用于臨床人類免疫缺陷病毒感染的輔助診斷。

【產品性能指標】

1、檢測HIV抗體國家陰性參考品，應符合要求。

2、檢測HIV抗體國家陽性參考品，應符合要求。

3、用6份HIV抗體國家最低檢出限參考品，陽性反應不得少于3份，且基質血清為陰性。

4、用1份HIV抗體國家精密性參考品進行檢定，CV(%)應不高于15%(n=10)。

5、穩定性實驗：試劑各組分置37℃至少6天，檢定結果應達到標準。

【注意事項】

1、 本品僅用于體外診斷，僅限于檢測人體血清、血漿；檢測結果作為診斷指示之一。

2、 從2～8℃條件下取出的樣本應置室溫平衡30分鐘再進行檢測。

3、 須確保樣品加樣量的準確，如果加樣不準確，可能會導致錯誤的試驗結果。

4、 使用微量移液器手工加樣時，應每次更換吸頭吸取樣本。

5、 在操作過程中應盡量避免反應微孔中產生氣泡。

6、 濃縮洗滌液系高濃度磷酸鹽，可能會形成結晶，如未完全溶解，會影響試驗結果，同時可能會堵住自動加樣器或洗板機管道。若出現結晶，請放置37℃充分溶解，然后稀釋混勻使用。

7、 封板膠紙不能重復使用。

8、 用水浴鍋時，請將反應板浸放于水中1/3，底部以網格支撐物支撐，水溫控制在37℃。

9、洗板：

1）以洗板機洗板時，洗板機的加液量至關重要，既避免洗液過量溢出，又能充滿反應微孔中，洗板次數不應該少于5次，并經常注意檢查加液頭是否堵塞。

2）手工洗板時，請勿使用帶紙屑的吸水材料拍板，以防外源性過氧化物酶類似物或氧化還原物質與顯色劑發生反應，影響檢測結果的準確性。

3）洗板時所用的吸水紙請勿反復使用。

4）洗板機最好在每次使用前、后，用蒸餾水或去離子水清洗干凈，以防止管道堵塞或腐蝕。

10、如使用全自動酶標分析系統，可能會存在系統的誤差，應對系統參數設定做適當調整，以滿足國家相關質控品要求。

11、如果有任何試劑接觸皮膚和眼睛，必須用大量清水對該部位進行擴大清洗和消毒；終止液為硫酸，具有腐蝕性。

12、試劑盒內有關組份及臨床樣本均視為有潛在傳染性，請按相關的實驗室工作規范來執行和處理。